엘리사:실험 결과를 분석하는 방법

엘리사,또는 효소 연결 면역 흡착 분석,검출 및 펩타이드,단백질,항체,호르몬 등의 물질을 정량화하는 데 사용되는 도구입니다. 그것은 분석될 견본의 추가에 선행된 표면에 항원 항체의 동원정지를 관련시킵니다. 검출은 특정 항원-항체 반응에 의존한다.

자룬 온타크라이|

엘리사를 실행하기 전에해야 할 일

엘리사 테스트는 항상 표준 편차와 변동 계수를 계산하기에 충분한 수의 샘플을 달성하기 위해 복제(중복 또는 삼중)에서 수행해야합니다. 오차 계수는 20%미만으로 유지되어야합니다. 계산된 오차가 높으면 파이펫팅,플레이트 및 시약의 오염,증발 및/또는 온도로 인해 발생하는 오류를 평가해야 합니다.

표준 곡선

표준 곡선은 샘플의 농도를 측정하는 데 사용됩니다. 먼저,표준 농도(페이지/밀리람베르트)의 흡광도 값을 플로팅한다. 또한 표준 샘플 데이터를 포함하지 않고 배경 잡음을 감지하고 측정하는 데 사용되는 음수 곡선이 수행됩니다. 정확한 측정을 위해서는 이 배경 값을 표준 곡선에서 빼야 합니다.

알려진 농도의 흡광도 값은 양성 대조군으로서 플로팅될 수 있다. 표적 단백질의 농도는 먼저 평균 흡광도를 계산한 다음 표준 곡선을 사용하여 농도를 추정함으로써 도출된다.

희석 요인도 고려해야합니다. 예를 들어,샘플을 4 배로 희석 한 경우,농도를 도출하기 위해 표준 곡선을 사용하기 전에 흡광도에 4 를 곱해야합니다.

변동 계수

변동 계수의 정의는 표준 편차와 평균–즉 표준 편차(10)/평균(10)의 비율입니다. 변동 계수의 큰 값은 우물 사이의 시약의 피펫팅 또는 혼합,박테리아 또는 곰팡이 오염,우물 건조 또는 온도 변화로 인한 부정확성을 나타냅니다.

스파이크 회복

엘리사 테스트를 실행 한 후 얻은 값은 표적 단백질이 항체와 어떻게 상호 작용하는지에 달려 있으며,이 상호 작용은 표준 단백질 곡선과 비교됩니다. 버퍼,매트릭스 및 이종 항체를 포함한 여러 요인이 샘플의 결합에 영향을 줄 수 있으므로 엘리사의 정확성을 결정할 때이를 고려해야합니다.

스파이크 분석실험은 엘리사 결과의 정확도를 결정하기 위하여 실행될 수 있습니다. 이 분석실험에서는,재조합형 단백질 알려진 양은 표본에 안으로 추가되거나 못을 박습니다. 그런 다음 표준 곡선을 사용하여 재료의 양을 측정합니다. 측정 값의 큰 편차는 분석에서 알 수없는 요소로 인한 오류를 나타낼 수 있습니다.

선형성 분석실험

선형성 분석실험은 또한 엘리사의 정확도를 결정하기 위하여 이용됩니다. 이 경우,’스파이크 된 샘플’은 1:2,1:4 및 1:8 로 직렬로 희석된다. 변경된 샘플의 농도가 검출되면,그리고 결과가 측정에서 선형 변화를 표시하지 않는 경우,그것은 엘리사의 정확도에 오류를 나타낼 수 있습니다.

어떤 경우에는,오류가 특정 농도에서 관찰되고 더 이상 낮은 농도에서 관찰되지 않을 수 있다. 이러한 경우에,샘플은 농도 측정이 수행되기 전에 희석되어야 할 수도 있다.

문제 해결

배경 잡음은 다음과 같은 여러 요인에 의해 발생할 수 있습니다:

• 웰의 불충분 한 세척
• 오염 된 세척 완충액
• 너무 많은 검출 시약
• 항체
• 완충액 및/또는 분석물의 침전

때때로,열악한 표준 곡선이 생성 될 수있다. 이 표준 솔루션의 오류,표준의 저하로 인해 수 있습니다,표준이 부적절하게 재구성,또는 곡선이 규모에 맞지 않는 경우. 후자를 고려할 때 로그 로그 또는 5 매개 변수 로지스틱 곡선과 같은 다른 스케일을 사용하여 플로팅을 수행 할 수 있습니다.

추가 읽기

• 모든 효소 결합 면역 흡착 분석(엘리사)함량
• 엘리사 응용
• 단백질을 검출하는데 사용되는 웨스턴 블롯-실험실 기술
• 항체 응용
• 유전자 발현 측정

수랏 박사

수랏 박사 졸업 2016 년 타타 기초 연구소의 세포 생물학 및 기계 생물학(인도 뭄바이). 그녀의 박사 학위에 앞서,수랏은 과학 학사 공부(B.Sc.)그녀는 에이즈에 관련된 단백질을 연구하기 위해 인도 과학 아카데미 여름 원정대를받는 동물학 학위. 그녀는 의학 윤리,데이터 조작,사이비 과학 및 미신,교육 및 인간 진화와 같은 광범위한 주제에 대한 특집 기사를 제작합니다. 그녀는 과학 커뮤니케이션에 대한 열정과 생명 과학의 모든 영역을 다루는 기사를 씁니다.

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