ELISA: Comment analyser les Résultats Expérimentaux

Par Dr. Surat P, Ph.D. Examiné par Dr. Tomislav Meštrović, MD, Ph.D.

ELISA, ou Dosage immuno-enzymatique, est un outil utilisé pour détecter et quantifier des substances, telles que des peptides, des protéines, des anticorps et des hormones. Elle implique l’immobilisation d’un antigène ou d’un anticorps sur une surface, suivie de l’ajout d’un échantillon à analyser. La détection dépend d’une réaction antigène-anticorps spécifique.

Jarun Ontakrai |

Que faire avant d’exécuter un test ELISA

Un test ELISA doit toujours être effectué en répliques (doublons ou triplets) afin d’obtenir un nombre suffisant d’échantillons pour calculer l’écart-type et le coefficient de variation. Le coefficient d’erreur doit être maintenu à moins de 20%. Si l’erreur calculée est élevée, les erreurs dues au pipetage, à la contamination des plaques et des réactifs, à l’évaporation et / ou à la température doivent être évaluées.

Courbe standard

Une courbe standard est utilisée pour mesurer la concentration de l’échantillon. Tout d’abord, les valeurs d’absorbance des concentrations standard (pg/ml) sont tracées. Une courbe négative est également réalisée qui ne contient aucune donnée d’échantillon standard et est utilisée pour détecter et mesurer le bruit de fond. Pour une mesure précise, cette valeur de fond doit être soustraite de la courbe standard.

Les valeurs d’absorbance de concentration connue peuvent être tracées comme témoin positif. La concentration de la protéine cible est obtenue en calculant d’abord l’absorbance moyenne, puis en utilisant la courbe standard pour estimer la concentration.

Les facteurs de dilution doivent également être pris en compte. Par exemple, si l’échantillon a été dilué quatre fois, l’absorbance doit être multipliée par quatre avant d’utiliser la courbe standard pour calculer la concentration.

Coefficient de variation

La définition du coefficient de variation est le rapport entre l’écart type et la moyenne – c’est-à-dire l’écart type (σ) / moyenne (µ). De grandes valeurs de coefficient de variation indiquent des inexactitudes dues au pipetage ou au mélange des réactifs entre les puits, à la contamination bactérienne ou fongique, au dessèchement des puits ou aux variations de température.

Récupération du pic

La valeur obtenue après l’exécution du test ELISA dépend de la façon dont une protéine ciblée interagit avec les anticorps, et cette interaction est comparée à une courbe protéique standard. Plusieurs facteurs – y compris les anticorps tampons, matriciels et hétérophiles – peuvent affecter la liaison de l’échantillon, cela doit donc être pris en compte lors de la détermination de la précision d’un ELISA.

Un test de pointe peut être effectué pour déterminer la précision des résultats ELISA. Dans ce test, une quantité connue de protéine recombinante est ajoutée ou dopée à l’échantillon. Ensuite, en utilisant la courbe standard, la quantité de matériau est mesurée. Des écarts importants dans les valeurs mesurées peuvent indiquer des erreurs dues à des éléments inconnus dans le test.

Dosage de linéarité

Le dosage de linéarité est également utilisé pour déterminer la précision de l’ELISA. Dans ce cas, l' »échantillon dopé » est dilué en série à 1: 2, 1: 4 et 1: 8. Si la concentration de l’échantillon modifié est détectée et si les résultats ne montrent pas de changement linéaire des mesures, cela peut indiquer des erreurs dans la précision de l’ELISA.

Dans certains cas, des erreurs peuvent être observées à certaines concentrations et ne plus être observées à des concentrations plus faibles. Dans de tels cas, l’échantillon peut devoir être dilué avant que les mesures de concentration ne soient effectuées.

Dépannage

Le bruit de fond peut être causé par un certain nombre de facteurs, notamment:

• Lavage insuffisant des puits
• Tampons de lavage contaminés
• Trop de réactif de détection
• Réactivité croisée de l’anticorps
• Précipitation du tampon et/ou de l’analyte

Parfois, une mauvaise courbe standard peut être générée. Cela peut être dû à des erreurs dans la solution étalon, à une dégradation de l’étalon, à une reconstitution incorrecte de l’étalon ou si la courbe ne correspond pas à l’échelle. Compte tenu de ce dernier, le traçage peut être effectué à l’aide de différentes échelles, telles que log-log ou courbe logistique à 5 paramètres.

Lectures supplémentaires

• Tout le Contenu du Test Immuno-Enzymatique (ELISA)
• Applications ELISA
• Technique de Western Blot-Lab Utilisée pour détecter les Protéines
• Applications d’anticorps
• Mesure de l’Expression des Gènes

Écrit par

Dr. Surat P

Dr. Surat a obtenu un doctorat. en Biologie Cellulaire et Mécanobiologie de l’Institut de Recherche Fondamentale Tata (Mumbai, Inde) en 2016. Avant son doctorat, Surat a étudié pour un baccalauréat Science sciences (B.Sc .) diplôme en zoologie, au cours duquel elle a reçu une bourse d’été de l’Académie indienne des Sciences pour étudier les protéines impliquées dans le sida. Elle produit des articles de fond sur un large éventail de sujets, tels que l’éthique médicale, la manipulation de données, la pseudoscience et la superstition, l’éducation et l’évolution humaine. Elle est passionnée par la communication scientifique et écrit des articles couvrant tous les domaines des sciences de la vie.

Citations