O objetivo deste trabalho foi determinar quanto tempo após a administração de benzodiazepínicos clonazepam (CLO), seu principal metabólito 7-aminoclonazepam (7-ACLO) pode ser detectado na urina coletada a partir de 10 voluntários saudáveis que receberam uma única de 3 mg de dose de Klonopin (clonazepam). Esses dados seriam de grande importância para as agências de aplicação da lei tentando determinar o melhor intervalo de tempo para a coleta de urina de uma vítima de abuso sexual facilitado por drogas, a fim de revelar o uso de drogas. Foi desenvolvido e validado um método de NCI-GC-MS altamente sensível para a quantificação simultânea da CLO e do seu principal metabolito 7-ACLO na urina. Foram colhidas as seguintes amostras de urina de cada voluntário: uma antes da administração CLO e 6 h, E 1, 3, 5, 8, 10, 14, 21 e 28 dias depois. Todas as amostras de urina (1 mL) foram extraídas após adição do padrão interno (D(5)-diazepam) e da hidrólise enzimática ( beta-glucuronidase) utilizando colunas de extracção de fase sólida. As curvas padrão para CLO (500-4000 pg x mL (-1)) e 7-ACLO(50-2000 pg x mL (-1)) foram preparadas por adição de alíquotas de urina negativa. A urina de cada indivíduo ainda foi positiva para 7-ACLO 14 dias após a administração do medicamento. Oito dos dez voluntários apresentaram quantidades mensuráveis do metabolito 21 dias após a administração. Um voluntário ainda deu positivo 28 dias após a administração. Seis dos voluntários apresentaram concentrações de 7-ACLO na urina que atingiram o pico no dia 1 após a administração. Um voluntário teve a maior concentração de 7-ACLO em 3 dias, dois voluntários em 5 dias, e um em 8 dias. O intervalo de concentrações detectadas foi de 73, 0 pg x mL (- 1) a 183, 2 ng x mL (- 1). A CLO não foi detectada em nenhuma das amostras.