Úvod: generace Trombinu (TG) hodnotí hemostatické schopnosti jedince a svědčí o osoby krvácení a trombózy riziko. TG závisína rovnováze mezi pro-a antikoagulačními procesy v plazmě srážení krve. Nedávno jsme vyvinuli metodu pro studium hlavních pro-a antikoagulačních procesů na bázi TG, nazývanou metoda dynamiky trombinu. Je známo, že léčba antagonisty vitaminu K (VKA) snižuje TG a že snížení TG koreluje s mezinárodním normalizovaným poměrem (INR). V této studii, naším cílem je zkoumat účinek terapie VKA na dynamiku TG zkoumáním přeměny protrombinu a inaktivace trombinu.
materiály a metody: TG byl měřen v plazmě chudé na destičky při 1 pM tkáňovém faktoru u 129 zdravých subjektů a 129 pacientů léčených VKA. Pacienti byli klasifikováni podle hodnoty INR: INR<2 (n=17), 2<INR<3 (n=55), 3<INR<4 (n=38) a INR>4 (n=19). Dynamika trombinu byla vypočtena z křivek TG a plazmatických hladin antitrombinu (AT), α2-makroglobulinu (a2M) a fibrinogenu. Tři trombinu dynamics parametry byly stanoveny: celkové množství protrombinu konverze (PCtot), maximální rychlost konverze protrombinu (PCmax) a trombinu kaz kapacita (TDC) každého vzorku plazmy.
výsledky: léčba antagonisty vitaminu K významně snížila ETP a výšku píku při všech hodnotách INR (p<0,001)a INR negativně koreluje s TEP a výškou píku (R2=0,47, p<0,001). Doba zpoždění byla u pacientů prodloužena ve srovnání s kontrolami (3, 3 vs. 16, 3 min, P<0, 001). VKA snižuje konverzi protrombinu snížením celkového množství přeměněného protrombinu i maximální rychlosti protrombinázy (obrázek 1A-C). Překvapivé je, že rychlost inaktivace trombinu byla oslabených pacientů léčených VKA, a tento efekt byl nezávislý na INR (0.67 vs. 0.58 min-1, p<0.001, obr 1D).
jak bylo dříve uvedeno, kapacita rozpadu trombinu závisí hlavně na plazmatické hladině antitrombinu a fibrinogenu. Plazmatické hladiny antitrombinu byly srovnatelné mezi zdravými jedinci a pacienty na VKA (obrázek 2A) a ukázal jasný pozitivní korelace s trombin rozpadu konstantní ve skupině pacientů (R2=0.72, p<0.001, obr 2C). Protože se hladiny antitrombinu u zdravých subjektů a pacientů nelišily, rozdíl v TDC nelze přičíst antitrombinu. V kontrastu, hladiny fibrinogenu byly zvýšené u všech pacientů, bez ohledu na INR (obrázek 2B), a byli negativně koreluje s TDC (R2=0.13, p<0.001, obrázek 2D). Proto jsme provedli in silico testování, aby prošetřila, zda trombinu kaz je oslabených pacientů tím, zvýšené hladiny fibrinogenu, pomocí výpočtu protrombinového konverze, jako by hladiny fibrinogenu byly fyziologické (průměrná hladina fibrinogenu našel ve skupině zdravých jedinců). Obrázek 2E-F ukazuje, že kapacita rozpadu trombinu u pacientů je ve srovnání s kontrolami snížena v důsledku zvýšených hladin fibrinogenu. Pokud v in silico model trombinu kaz kapacity měřené hladiny fibrinogenu jsou nahrazeny průměrný zdravý předmět hladiny fibrinogenu, trombin rozpadu konstantní obnoví do normálu (0.67 vs. 0.63 min-1, p=0.238) v VKA-léčených pacientů.
Závěr: Trombinu dynamics analýza ukazuje, že konverze protrombinu je snížena u pacientů léčených VKA a že inaktivace trombinu je výrazně oslabené. Ukazujeme, že tento účinek lze připsat zvýšeným hladinám fibrinogenu, které doprovázejí léčbu VKA.
dynamika trombinu u zdravých jedinců a pacientů s VKA. A) protrombinové konverzní křivky. (B) PCtot: celkové množství přeměněného protrombinu; (C) PCmax: maximální rychlost přeměny protrombinu; (D) TDC: kapacita rozpadu trombinu. * p<0,05, * * p<0,01, * * * p<0,001 ve srovnání se zdravými subjekty.
dynamika trombinu u zdravých jedinců a pacientů s VKA. A) protrombinové konverzní křivky. B) PCtot: celkové množství přeměněného protrombinu; C) PCmax: maximální rychlost konverze protrombinu; D) TDC: kapacita rozpadu trombinu. * p<0,05, * * p<0,01, * * * p<0,001 ve srovnání se zdravými subjekty.
úloha plazmatických hladin antitrombinu a fibrinogenu při útlumu inaktivační kapacity trombinu u pacientů na VKA. A) hladiny antitrombinu u zdravých subjektů a pacientů; b) hladiny fibrinogenu u zdravých subjektů a pacientů. (C-D) korelace kapacity rozpadu trombinu s hladinami antitrombinu (C) a fibrinogenu (D). (E) měřená kapacita rozpadu trombinu u zdravých subjektů a pacientů. (F) simulovaná kapacita rozpadu trombinu u subjektů s heatií a pacientů na fyziologických hladinách fibrinogenu. * p<0,05, * * p<0,01, * * * p<0,001 ve srovnání se zdravými subjekty.
úloha plazmatických hladin antitrombinu a fibrinogenu při útlumu inaktivační kapacity trombinu u pacientů na VKA. A) hladiny antitrombinu u zdravých subjektů a pacientů; b) hladiny fibrinogenu u zdravých subjektů a pacientů. (C-D) korelace kapacity rozpadu trombinu s hladinami antitrombinu (C) a fibrinogenu (D). (E) měřená kapacita rozpadu trombinu u zdravých subjektů a pacientů. (F) simulovaná kapacita rozpadu trombinu u subjektů s heatií a pacientů na fyziologických hladinách fibrinogenu. * p<0,05, * * p<0,01, * * * p<0,001 ve srovnání se zdravými subjekty.
Hemker:Diagnostica Stago: Poradenství.