Figura 3: CPI cu anticorp Drosha (ab12286)
amniocite feminine umane imunosteinizate cu Drosha (FITC) (diluție 1/25). ADN-ul este etichetat roșu cu iodură de propidiu.
RISC și RITS
studiile efectuate în drojdia de fisiune (Schizosaccharomces pombe) au demonstrat că reducerea la tăcere centromerică (procesul de reducere la tăcere a transgenelor care se integrează în regiunile repetate centromerice) necesită componente ale căii RNAi și, prin urmare, în acest caz, reducerea la tăcere funcționează la nivel transcripțional (Ekwall 2004; Verdel și Moazed 2005).
complexul efector din drojdia de fisiune pare a fi distinct de RISC. siRNAs sunt încorporate în schimb într-un complex numit rit (inițierea indusă de ARN a tăcerii genei transcripționale). RITS cuprinde o proteină cromodomaină (Chp1), Argonaut 1 (Ago1), o proteină cu funcție necunoscută, Tas3, precum și molecule de siRNA.
rit-urile vizează zone cromozomiale specifice pentru reducerea la tăcere prin producerea unei structuri represive de cromatină cunoscută sub numele de heterocromatină prin metilarea histonei.
rezumat
ARNr mediată de introducerea Arnd lung a fost utilizată pentru a investiga funcția genică într-o varietate de organisme, inclusiv plante și Drosophila, cu toate acestea, această abordare nu poate fi aplicată celulelor de mamifere, deoarece introducerea Arnd mai mare de 30 de nucleotide induce un răspuns interferon nespecific (răspuns antiviral), care are ca rezultat degradarea ARNm și, de asemenea, determină o inhibare globală a translației ARNm.
pentru a ocoli aceste probleme, moleculele de siRNA sintetizate chimic care imită produsele Dicer pot fi utilizate pentru a investiga funcția genelor la mamifere.
alternativ, vectorii plasmidici concepuți pentru a produce molecule scurte de ARN ac de păr pot fi exploatați pentru a induce tăcerea genelor în sistemele de mamifere. Astfel, în viitor, ar putea fi fezabilă tratarea bolilor umane prin oprirea expresiei genelor prin direcționarea degradării ARNm specifice.
Vezi toate resursele de interferență ARN.