kuva 3: ICC, jolla on Drosha-vasta-aine (ab12286)
ihmisen naisen amniosyytit, jotka ovat immunostettuja DROSHALLA (FITC) (1 / 25 laimennos). DNA on merkitty punaiseksi propidiumjodidilla.
RISC ja RITS
Fissiohiivalla (Schizosaccharomces pombe) tehdyt tutkimukset ovat osoittaneet, että sentromeerinen äänenvaimennus (transgeenien äänenvaimennusprosessi, joka integroituu sentromeerisiin toistoalueisiin) edellyttää RNAi-reitin komponentteja, joten tässä tapauksessa äänenvaimennus toimii transkriptiotasolla (Ekwall 2004; Verdel and Moazed 2005).
fissiohiivan efektorikompleksi näyttää olevan erillinen RISC: stä. sirnat sisällytetään sen sijaan kompleksiin nimeltä RITS (RNA-induced Initiation of Transkriptional geeni Silencing). RITS koostuu kromodomaiiniproteiinista (Chp1), Argonaute 1: stä (Ago1), tuntemattomasta toiminnasta vastaavasta proteiinista Tas3: sta sekä siRNA-molekyyleistä.
RITS kohdistuu tiettyihin kromosomialueisiin, jotka voidaan hiljentää tuottamalla heterokromatiinina tunnettua repressiivistä kromatiinirakennetta histonimetylaation avulla.
Yhteenveto
pitkän dsRNA: n välittämää RNAi: ta on käytetty geenien toiminnan tutkimiseen eri organismeissa, kuten kasveissa ja Drosofilassa, mutta tätä lähestymistapaa ei voida soveltaa nisäkässoluihin, koska yli 30 nukleotidin pituinen dsRNA aiheuttaa epäspesifisen interferonivasteen (anti-virusvasteen), joka johtaa mRNA: n hajoamiseen ja aiheuttaa myös mRNA: n translaation maailmanlaajuisen eston.
näiden ongelmien kiertämiseksi voidaan käyttää kemiallisesti syntetisoituja Sirna-molekyylejä, jotka jäljittelevät Dicer-tuotteita, geenien toiminnan tutkimiseen nisäkkäillä.
Vaihtoehtoisesti voidaan käyttää hyväksi plasmidivektoreita, jotka on suunniteltu tuottamaan lyhyitä hiusneula-RNA-molekyylejä geenien hiljentämiseksi nisäkkäiden systeemeissä. Tulevaisuudessa voi siis olla mahdollista hoitaa ihmisten sairauksia sulkemalla geeniekspressio ohjaamalla spesifisen mRNA: n hajoamista.
Katso kaikki RNA-interferenssiresurssit.