La geologia del Pleistocene, e in particolare l’ultimo Massimo glaciale di circa 26,5 ka, è un fattore critico delle distribuzioni attuali delle specie e dei livelli di diversità genetica nelle regioni settentrionali. Utilizzando i dati della sequenza del DNA mitocondriale, abbiamo testato diverse previsioni relative alla ricolonizzazione postglaciale degli Stati Uniti settentrionali e del Canada meridionale da parte di Mudpuppies (Necturus maculosus). Le nostre analisi hanno rivelato una spaccatura significativa tra lignaggi occidentali e orientali, con la divisione corrispondente alla posizione del fiume Mississippi. I nostri dati supportano la presenza di uno o più refugia glaciale mississippiano, con successiva espansione e diversificazione di un cluster occidentale nel Midwest superiore e un cluster orientale nei Grandi Laghi orientali e New England. Come previsto nei casi di colonizzazione postglaciale, ciascuno di questi cluster contiene un singolo aplotipo diffuso e comune insieme a numerosi aplotipi a bassa frequenza e strettamente correlati. Date le recenti preoccupazioni per la conservazione degli anfibi in generale e dei Mudpuppies in particolare, discutiamo i nostri risultati alla luce della conservazione delle specie. La conoscenza della diversità genetica di una specie consente una gestione informata e facilita le decisioni che preservano l’adattamento locale e il potenziale evolutivo.