wprowadzenie: wytwarzanie trombiny (TG) ocenia zdolność hemostatyczną pacjenta i wskazuje na ryzyko krwawienia i zakrzepicy u danej osoby. TG zależy od równowagi między procesami pro-i antykoagulacyjnymi w osoczu krzepnięcia. Niedawno opracowaliśmy metodę badania głównych procesów pro-i przeciwzakrzepowych na podstawie TG, zwaną metodą dynamiki trombiny. Wiadomo, że leczenie antagonistą witaminy K (VKA) zmniejsza TG i że zmniejszenie TG koreluje z międzynarodowym współczynnikiem znormalizowanym (INR). Celem niniejszego badania jest zbadanie wpływu terapii VKA na dynamikę TG poprzez zbadanie konwersji protrombiny i inaktywacji trombiny.
materiały i metody: TG oznaczono w osoczu ubogim w płytki krwi przy współczynniku tkankowym 1 pM u 129 zdrowych osób i 129 pacjentów leczonych VKA. Pacjenci zostali sklasyfikowani według wartości INR: INR<2 (n=17), 2<INR<3 (n=55), 3<INR<4 (N=38) I INR>4 (N=19). Dynamikę trombiny obliczono na podstawie krzywych TG oraz stężenia antytrombiny (AT), α2-makroglobuliny (a2M) i fibrynogenu w osoczu. Określono trzy parametry dynamiki trombiny: całkowitą ilość konwersji protrombiny (PCtot), maksymalną szybkość konwersji protrombiny (PCmax) i zdolność rozpadu trombiny (TDC) każdej próbki osocza.
wyniki: leczenie antagonistą witaminy K znacznie zmniejszyło ETP i wysokość szczytową przy wszystkich wartościach INR (p< 0, 001), A INR jest ujemnie skorelowany z TEP i wysokością szczytową (R2=0, 47, p<0, 001). Czas opóźnienia był wydłużony u pacjentów w porównaniu z grupą kontrolną(3, 3 vs. 16, 3 min, P<0, 001). VKA zmniejsza konwersję protrombiny, zmniejszając zarówno całkowitą ilość przekształconej protrombiny, jak i maksymalną szybkość protrombinazy (fig. 1A-C). Co zaskakujące, szybkość inaktywacji trombiny była atenuowana u pacjentów leczonych VKA, a efekt ten był niezależny od INR (0, 67 VS. 0, 58 min-1, P<0, 001, fig. 1D).
jak wcześniej informowano, zdolność rozpadu trombiny zależy głównie od stężenia antytrombiny i fibrynogenu w osoczu. Stężenie antytrombiny w osoczu było porównywalne u zdrowych osób i u pacjentów leczonych VKA (fig. 2A) i wykazywało wyraźną dodatnią korelację ze stałą rozpadu trombiny w grupie pacjentów (R2=0, 72, p<0, 001, fig. 2C). Ponieważ stężenia antytrombiny nie różniły się między zdrowymi osobami a pacjentami, różnicy w TDC nie można przypisać antytrombinie. Natomiast stężenie fibrynogenu było podwyższone u wszystkich pacjentów, niezależnie od INR (fig. 2B) i było ujemnie skorelowane z TDC (R2=0,13, p<0,001, fig. 2D). Dlatego w badaniu silico zbadaliśmy, czy rozpad trombiny u pacjentów jest atenuowany przez podwyższony poziom fibrynogenu, obliczając konwersję protrombiny tak, jakby poziom fibrynogenu był fizjologiczny (średni poziom fibrynogenu w grupie zdrowych osób). 2e-F pokazuje, że rzeczywiście zdolność rozpadu trombiny u pacjentów jest zmniejszona w porównaniu z grupą kontrolną z powodu zwiększonego stężenia fibrynogenu. Jeśli w modelu in silico zdolności rozpadu trombiny zmierzone poziomy fibrynogenu są zastępowane przez średnie poziomy fibrynogenu u zdrowych osób, stała rozpadu trombiny przywraca prawidłową wartość (0,67 vs. 0,63 min-1, p=0,238) u pacjentów leczonych VKA.
wniosek: analiza dynamiki trombiny pokazuje, że konwersja protrombiny jest zmniejszona u pacjentów leczonych VKA i że inaktywacja trombiny jest znacząco osłabiona. Wykazujemy, że ten ostatni efekt można przypisać podwyższonemu poziomowi fibrynogenu towarzyszącemu leczeniu VKA.
dynamika trombiny u zdrowych osób i pacjentów z VKA. A) krzywe konwersji protrombiny. B) pctot: całkowita ilość przekształconej protrombiny; C) PCmax: maksymalna szybkość konwersji protrombiny; D) TDC: zdolność rozpadu trombiny. *p<0, 05, **P<0, 01, ** * p<0, 001 w porównaniu do osób zdrowych.
dynamika trombiny u zdrowych osób i pacjentów z VKA. A) krzywe konwersji protrombiny. B) Pctot: całkowita ilość przekształconej protrombiny; C) PCmax: maksymalny współczynnik konwersji protrombiny; D) TDC: zdolność rozpadu trombiny. *p<0, 05, **P<0, 01, ** * p<0, 001 w porównaniu do osób zdrowych.
rola stężenia antytrombiny i fibrynogenu w osoczu w osłabianiu zdolności inaktywacji trombiny u pacjentów leczonych VKA. A) poziom antytrombiny u zdrowych osób i pacjentów; B) poziom fibrynogenu u zdrowych osób i pacjentów. (C-D) korelacja zdolności rozpadu trombiny z poziomem antytrombiny (C) i fibrynogenu (D). E) mierzoną zdolność rozpadu trombiny u zdrowych osób i pacjentów. F) symulowana zdolność rozpadu trombiny u pacjentów z heathy i pacjentów na fizjologicznym poziomie fibrynogenu. *p<0, 05, **P<0, 01, ** * p<0, 001 w porównaniu do osób zdrowych.
rola stężenia antytrombiny i fibrynogenu w osoczu w osłabianiu zdolności inaktywacji trombiny u pacjentów leczonych VKA. A) poziom antytrombiny u zdrowych osób i pacjentów; B) poziom fibrynogenu u zdrowych osób i pacjentów. (C-D) korelacja zdolności rozpadu trombiny z poziomem antytrombiny (C) i fibrynogenu (D). E) mierzoną zdolność rozpadu trombiny u zdrowych osób i pacjentów. F) symulowana zdolność rozpadu trombiny u pacjentów z heathy i pacjentów na fizjologicznym poziomie fibrynogenu. *p<0, 05, **P<0, 01, ** * p<0, 001 w porównaniu do osób zdrowych.
Hemker: Diagnostica Stago: Doradztwo.