El objetivo de este trabajo fue determinar cuánto tiempo después de la administración de clonazepam benzodiacepínico (CLO), su metabolito principal 7-aminoclonazepam (7-ACLO) se pudo detectar en orina recogida de 10 voluntarios sanos que recibieron una dosis única de 3 mg de clonazepam Klonopin (clonazepam). Tales datos serían de gran importancia para los organismos encargados de hacer cumplir la ley que tratan de determinar el mejor intervalo de tiempo para la recolección de orina de una víctima de agresión sexual facilitada por drogas a fin de revelar el consumo de drogas. Se desarrolló y validó un método NCI-GC-MS altamente sensible para la cuantificación simultánea de CLO y su metabolito principal 7-ACLO en orina. Se recogieron las siguientes muestras de orina de cada voluntario: una antes de la administración de CLO, y 6 h, y 1, 3, 5, 8, 10, 14, 21 y 28 días después. Todas las muestras de orina (1 ml) se extrajeron después de agregar el patrón interno(D ( 5)-diazepam) e hidrólisis enzimática (beta-glucuronidasa) utilizando columnas de extracción en fase sólida. Se prepararon curvas estándar para CLO (500-4000 pg x mL(-1)) y 7-ACLO (50-2000 pg x mL(-1)) mediante la adición de alícuotas de orina negativas. La orina de cada sujeto seguía siendo positiva para 7-ACLO 14 días después de la administración del medicamento. Ocho de los diez voluntarios presentaron cantidades mensurables del metabolito 21 días después de la administración. Un voluntario seguía dando positivo 28 días después de la administración. Seis de los voluntarios tenían concentraciones de 7 ACLO en orina que alcanzaron su punto máximo 1 día después de la administración. Un voluntario tuvo la mayor concentración de 7-ACLO a los 3 días, dos voluntarios a los 5 días y uno a los 8 días. El rango de concentraciones detectadas fue de 73.0 pg x mL(-1) a 183.2 ng x mL(-1). No se detectó CLO en ninguna de las muestras.