Rysunek 3: ICC z przeciwciałem Drosha (ab12286)
ludzkie amniocyty żeńskie immunostained Drosha (FITC) (rozcieńczenie 1/25). DNA oznaczono na Czerwono jodkiem propidium.
RISC i RITS
badania drożdży Rozszczepieniowych (Schizosaccharomces pombe) wykazały, że wyciszanie centromeryczne (proces wyciszania transgenów integrujących się w centromeryczne regiony powtórzeń) wymaga elementów szlaku RNAi i dlatego w tym przypadku wyciszanie działa na poziomie transkrypcyjnym (Ekwall 2004; Verdel and Moazed 2005).
kompleks efektorowy w drożdżach rozszczepialnych wydaje się różny od RISC. sirna są włączane zamiast tego do złożonego RITS (RNA-induced Initiation of Transcriptional Gene Silencing). RITS zawiera białko chromodomeny (Chp1), Argonaute 1 (Ago1), białko o nieznanej funkcji, Tas3, a także cząsteczki siRNA.
RITS celuje w specyficzne obszary chromosomalne do wyciszania poprzez wytwarzanie represyjnej struktury chromatyny znanej jako heterochromatyna poprzez metylację histonów.
podsumowanie
RNAi pośredniczone przez wprowadzenie długiego dsRNA zostało wykorzystane do zbadania funkcji genów w różnych organizmach, w tym w roślinach i Drosophila, jednak tego podejścia nie można zastosować do komórek ssaków, ponieważ wprowadzenie dsRNA dłuższego niż 30 nukleotydów indukuje niespecyficzną odpowiedź interferonu (odpowiedź anty-wirusową), która powoduje degradację mRNA, a także powoduje globalne hamowanie translacji mRNA.
aby obejść te problemy, chemicznie zsyntetyzowane cząsteczki siRNA, które naśladują produkty Dicer, mogą być używane do badania funkcji genów u ssaków.
alternatywnie, plazmidowe wektory zaprojektowane do wytwarzania krótkich spinek do włosów cząsteczek RNA mogą być wykorzystywane do indukowania wyciszania genów w układach ssaków. Tak więc w przyszłości możliwe będzie leczenie chorób ludzkich poprzez wyłączenie ekspresji genów poprzez kierowanie degradacją specyficznego mRNA.
Zobacz wszystkie zasoby interferencji RNA.