figur 3: ICC med Drosha-antistof (ab12286)
humane kvindelige amniocytter immuniseret med Drosha (FITC) (1/25 fortynding). DNA ‘ et er mærket rødt med propidiumiodid.
RISC og RITS
undersøgelser i fissionsgær (schisosaccharomces pombe) har vist, at centromerisk lyddæmpning (processen med lyddæmpning af transgener, der integreres i centromere gentagelsesregioner) kræver komponenter i RNAi-stien, og derfor fungerer lyddæmpning i dette tilfælde på transkriptionsniveau (Ekvæg 2004; Verdel og Moased 2005).
effektorkomplekset i fissionsgær ser ud til at være forskelligt fra RISC. sirna ‘ er inkorporeres i stedet i et kompleks betegnet RITS (RNA-induceret initiering af transkriptionel Genhæmning). RITS omfatter et chromodomainprotein (Chp1), Argonaute 1 (Ago1), et protein med ukendt funktion, Tas3, såvel som siRNA-molekyler.
RITS målretter specifikke kromosomale områder til lyddæmpning gennem produktion af en undertrykkende kromatinstruktur kendt som heterochromatin gennem histonmethylering.
Resume
RNAi medieret ved introduktion af lang dsRNA er blevet brugt til at undersøge genfunktion i en række organismer inklusive planter og Drosophila, men denne tilgang kan ikke anvendes på pattedyrceller, da introduktion af dsRNA længere end 30 nukleotider inducerer et ikke-specifikt interferonrespons (antiviralt respons), hvilket resulterer i nedbrydning af mRNA og også forårsager en global hæmning af mRNA-translation.
for at omgå disse problemer kan kemisk syntetiserede siRNA-molekyler, der efterligner Dicer-produkter, bruges til at undersøge genfunktion hos pattedyr.
alternativt kan plasmidvektorer designet til at producere korte hårnåls-RNA-molekyler udnyttes til at inducere genhæmning i pattedyrssystemer. I fremtiden kan det således være muligt at behandle menneskelige sygdomme ved at lukke genekspression ved at styre nedbrydningen af specifikt mRNA.
se alle RNA-interferensressourcer.