Abstract
Alpha 1-adrenerge Rezeptoren einer nicht-fusionierenden Muskelzelllinie (BC3H1) wurden an intakten und gebrochenen Zellpräparaten unter Verwendung des hochaffinen Antagonisten Prazosin identifiziert. In intakten Zellen ergaben sowohl Gleichgewichts- als auch kinetische Studien KD-Werte im Bereich von 0,07-0,12 nM. Die maximale Anzahl der durch Scatchard-Analyse bestimmten Bindungsstellen betrug etwa 85,000 +/- 9,000 websites/Zelle. Antagonisten, die an die Prazosin-Bindungsstellen mit Michaelis-Menten-Eigenschaften gebunden waren, und ihre Spezifität war typisch für alpha-1-adrenerge Rezeptoren. Weder nach Zellaufschluss noch durch Senkung der Inkubationstemperatur auf 4 Grad wurde eine signifikante Veränderung der Antagonistenbindung beobachtet. Im Gegensatz dazu waren in intakten Zellen bei 37 Grad Agonisten-Kompetitionskurven flach mit Hill-Koeffizienten von weniger als 1. Die Heterogenität der Prazosinbindungsstellen gegenüber (–) -Noradrenalin zeigte sich auch in Prazosinsättigungsexperimenten, die in Abwesenheit und in Gegenwart dieses Agonisten durchgeführt wurden. Nach Zellaufschluss nahmen die EC50-Werte der Agonisten-Kompetitionskurven ab und die Hill-Koeffizienten lagen nahe bei 1. Wenn die Temperatur von 37 Grad auf 4 Grad gesenkt wurde, stieg die Affinität zu (–) -Noradrenalin in intakten Zellen dramatisch um das 10.000-fache an und der Hill-Koeffizient der Wettbewerbskurve war gleich Eins. Diese durch die Temperatur induzierte Affinitätsverschiebung war bei Präparaten mit gebrochenen Zellen nicht so wichtig (50-fach).