Abstract
alfa 1-receptores adrenérgicos de uma linha de células musculares não fundentes (BC3H1) foram identificados em preparações intactas e de células quebradas utilizando o antagonista de alta afinidade prazosina. Em células intactas, tanto os estudos de equilíbrio como os estudos cinéticos deram valores de KD na gama de 0, 07-0, 12 nM. O número máximo de locais de ligação determinados pela análise Scatchard foi de cerca de 85,000 +/- 9,000 sites / cell. Antagonistas ligados aos locais de ligação da prazosina com características Michaelis-Menten, e a sua especificidade era típica dos receptores alfa-1-adrenérgicos. Não se observou qualquer modificação significativa da ligação dos antagonistas, quer após interrupção celular, quer baixando a temperatura de incubação para 4 graus. Em contraste, em células intactas a 37 graus, curvas de competição agonistas eram rasas com coeficientes de Hill inferiores a 1. A heterogeneidade dos locais de ligação da prazosina para a (–)-norepinefrina também apareceu em experimentos de saturação da prazosina realizados na ausência e na presença deste agonista. Após interrupção celular, os valores de EC50 das curvas de concorrência agonistas diminuíram e os coeficientes de Hill aproximaram-se de 1. Quando a temperatura foi reduzida de 37 graus para 4 graus, a afinidade para (–)-norepinefrina em células intactas aumentou dramaticamente em 10.000 vezes e o coeficiente de Colina da curva de competição foi igual à unidade. Esta mudança de afinidade induzida pela temperatura não foi tão importante nas preparações de células partidas (50 vezes).