Abstract
I recettori alfa 1-adrenergici di una linea cellulare muscolare non funzionante (BC3H1) sono stati identificati su preparati a cellule intatte e rotte utilizzando l’antagonista ad alta affinità prazosin. Nelle cellule intatte, sia gli studi di equilibrio che quelli cinetici hanno dato valori di KD nell’intervallo 0,07-0,12 nM. Il numero massimo di siti di legame determinato dall’analisi Scatchard era di circa 85,000 +/- 9,000 siti / cella. Gli antagonisti si sono legati ai siti di legame di prazosina con caratteristiche di Michaelis-Menten e la loro specificità era tipica dei recettori alfa 1-adrenergici. Non è stata osservata alcuna modifica significativa del legame antagonista dopo l’interruzione cellulare o abbassando la temperatura di incubazione a 4 gradi. Al contrario, nelle cellule intatte a 37 gradi, le curve di competizione agonista erano poco profonde con coefficienti di collina inferiori a 1. L’eterogeneità dei siti di legame della prazosina verso la (–)- noradrenalina è apparsa anche negli esperimenti di saturazione della prazosina condotti in assenza e in presenza di questo agonista. Dopo l’interruzione delle cellule, i valori EC50 delle curve di competizione agonista sono diminuiti e i coefficienti di Hill sono stati vicini a 1. Quando la temperatura è stata abbassata da 37 gradi a 4 gradi, l’affinità per (–)- noradrenalina nelle cellule intatte è aumentata drammaticamente di 10.000 volte e il coefficiente di collina della curva di competizione era uguale all’unità. Questo spostamento di affinità indotto dalla temperatura non era così importante nei preparati a cellule rotte (50 volte).