Figura 3: am con anticorpo Drosha (ab12286)
Amniociti femminili umani immunostained con Drosha (FITC) (diluizione 1/25). Il DNA è etichettato in rosso con ioduro di propidio.
RISC e RITS
Studi di lievito di fissione (Schizosaccharomces pombe) hanno dimostrato che centromerica silenziamento (il processo di silenziamento transgeni che si integrano con la centromerica regioni di ripetizione) richiede che i componenti del pathway di RNAi e quindi in questo caso il silenziamento opera a livello trascrizionale (Ekwall 2004; Verdel e Moazed 2005).
Il complesso effettore nel lievito di fissione sembra essere distinto dal RISC. I SIRNA sono invece incorporati in un complesso chiamato RITS (iniziazione indotta da RNA del silenziamento genico trascrizionale). RITS comprende una proteina cromodomaina (Chp1), Argonaute 1 (Ago1), una proteina di funzione sconosciuta, Tas3, così come le molecole di siRNA.
RITS mira a specifiche aree cromosomiche per il silenziamento attraverso la produzione di una struttura repressiva della cromatina nota come eterocromatina attraverso la metilazione dell’istone.
Sommario
RNAi mediata dall’introduzione di dsRNA lungo è stato utilizzato per studiare la funzione del gene in una varietà di organismi, compresi piante e Drosophila, tuttavia questo approccio non può essere applicata a cellule di mammifero, come l’introduzione di dsRNA più di 30 nucleotidi induce una non-specifica risposta interferone (anti-virale risposta), che comporta la degradazione di mRNA e causa anche di una globale inibizione della traduzione di mRNA.
Per aggirare questi problemi, le molecole siRNA sintetizzate chimicamente che imitano i prodotti Dicer possono essere utilizzate per studiare la funzione genica nei mammiferi.
In alternativa, i vettori plasmidici progettati per produrre molecole di RNA a forcina corta possono essere sfruttati per indurre il silenziamento genico nei sistemi di mammiferi. Pertanto, in futuro potrebbe essere fattibile trattare le malattie umane interrompendo l’espressione genica dirigendo la degradazione di mRNA specifico.
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