DISKUSSION
Denna studie ger belägg för att β-celler kan fungera väl i ett transplantat webbplats utan att närliggande icke–β-celler. För att studera Tubi-cellberikade transplantat måste holmar dispergeras i enstaka celler för att möjliggöra fluorescensaktiverad cellsortering. Våra initiala studier undersökte därför effekten av ödispersion och reaggregering på transplantationsresultat. När de dispergerade cellerna reagerades före transplantation behövdes färre celler för att vända hyperglykemi. Efter IPGTTs hade reaggregerade öar en glukosprofil som liknade viktmatchade icke-diabetiska, icke-transplanterade kontrollmöss. Möss transplanterade med 2,5 miljoner dispergerade öceller hade emellertid ännu lägre blodsockernivåer efter glukostoleransprovet. Detta resultat indikerar att transplantation av dispergerade öceller kan vara effektiv, förutsatt att tillräckliga antal transplanteras. Men om öceller reageras före transplantation kan hälften av antalet celler återställa normoglykemi. Dessa resultat är i linje med flera tidigare studier som har visat att insulinsekretoriska svar minskas i dispergerade öceller och förbättras genom reaggregering av cellerna (24-27). Detta överlägsna resultat kan bero på ett positivt inflytande av cellkommunikation vid insulinsekretion och väcker frågor om huruvida aggregerade celler är mer resistenta mot apoptos. Det är troligt att de dispergerade cellerna bildade kluster in vivo efter transplantation, men detta kan inträffa efter att många celler förlorats under de första dagarna efter transplantation. Sammanfattningsvis är det uppenbart att större antal dispergerade celler initialt krävs för att vända hyperglykemi.
i vår nästa studie berikades dispergerade holmceller med hjälp av fluorescerande aktiverad cellsortering. – celler sorterades enligt deras endogena fluorescens och framåtspridning (storlek), som tidigare beskrivits (19-21). Med hjälp av denna teknik kunde vi få cellpopulationer av 95% av cellerna. Dessa fraktioner som berikats med cellerna reagerades sedan före transplantationen. Möss som hade transplanterats med aggregat som berikats med celler i celler hade en snabb reversering av hyperglykemi på liknande sätt som möss som transplanterats med en liknande volym hela öar. Det bör noteras att antalet celler i burarna skulle ha varit lägre i ötransplantationerna jämfört med transplantationerna i burarna. Det är troligt att transplantationerna med 95% renhet i cellerna innehöll 20% fler celler i cellerna än i holmarna. Syftet med studien var dock att fastställa om renade celler av typen A. C., transplanterade i volymer som liknar dem som används vid ötransplantation, skulle kunna vända diabetes och att fastställa om celler av typen A. C. C. som härrör från stamceller någonsin skulle kunna vara användbara för transplantation till diabetespatienter. I glukostoleransprov 4 veckor efter transplantation hade möss som transplanterats med aggregat som berikats med celler som berikats med socker något lägre blodsockernivåer och tenderade att ha något högre insulinnivåer än de som transplanterats med holmar. Efter 12 veckor var det emellertid ingen skillnad mellan dessa grupper med avseende på glukostolerans, insulinnivåer eller graftinsulininnehåll. I denna experimentella serie, de icke-diabetiska, icke-transplanterade kontrollmössen var åldersmatchade snarare än viktmatchade. Medan vikterna hos de transplanterade mössen hade förblivit stabila eller sjunkit under sin diabetesperiod fortsatte kontrollmössen att gå upp i vikt under hela studien. Deras dåliga glukostolerans och högre insulinnivåer tyder på att dessa kontrollmöss hade blivit insulinresistenta. Dessutom kan de lägre glukosnivåerna hos de transplanterade mössen förklaras av det faktum att råttöar implanterades, eftersom råttor vanligtvis har lägre glukosnivåer än möss och kan ha en lägre börvärde för glukosstimulerad insulinsekretion.
dessa resultat visar att transplantationsresultatet av aggregat som berikas med celler i celler liknar det hos holmar. Transplantation av en renad population av Tubi-celler har tidigare visats av Keymeulen et al. (28) för att lyckas, även om det i denna studie föreslogs att blandning av endokrina celler som inte är celler i form av äggcellen med celler i form av äggcellen före transplantation förbättrade transplantatfunktionen. I Keymeulen-studien studerades transplantaten i 64 veckor snarare än de 12 veckorna i denna studie. Deras råttaxakicellstransplantat och blandade transplantat av råttaxakicellceller plus råttakokrinceller som inte var celler fungerade bra hos råttor fram till 20 veckor, då några av transplantaten började misslyckas. Vid 64 veckor hade alla transplantat, oavsett om de innehöll renade celler av typen eller blandade med andra endokrina celler som inte var av typen, delvis eller fullständigt misslyckats. De implanterade emellertid omkring 1,2-1,7 miljoner celler i råttor, vilket kan betraktas som en minimal massmodell. Denna grundliga studie visade också att celler från äldre råttdonatorer inte fungerar lika bra som celler från yngre råttdonatorer. Således kompletterar Keymeulen-studien resultaten från den aktuella studien genom att båda visar imponerande funktion av transplantat som består av renade bronkialceller. En annan celltyp inom holmar som potentiellt kan bidra till resultatet av transplantation är endotelcellen, som har rapporterats bidra till revaskularisering av transplanterade holmar (15,16). Det är emellertid inte klart att det finns tillräckligt med dessa celler för att ge ett meningsfullt bidrag. Icke desto mindre är det uppenbart från de aktuella studierna att även om endokrina icke–bronkialceller och donatorendotel kan vara fördelaktiga för funktionen hos transplanterade ötransplantat, verkar de inte vara nödvändiga för framgångsrik transplantation. Detta resultat tyder på att celler som härrör in vitro från stamceller eller någon annan källa kan vara mycket användbara för transplantationsändamål.
när transplantatsammansättningen studerades 12 veckor efter transplantationen hade de aggregat som berikats med celler som inte var med i cellerna i celler som inte var med i de ursprungliga preparaten. Även om detta inte var förvånande, var det anmärkningsvärt att finna att holmar som ursprungligen hade 25% icke–Xiaomi-celler hade endast 5% inom transplantat. De allra flesta av dessa celler är glukagoninnehållande celler i form av t.ex. Om de grafter som berikats med celler från celler som inte berikats med celler från celler som inte berikats med celler från öar hade förlorat i samma utsträckning som transplantaten från öar, hade man förväntat sig att de bara hade 1% av cellerna som inte berikats med celler från öar efter transplantationen. Det är också spännande att förlusten av icke-sackarisceller i ötransplantaten tycktes stanna vid 5%, vilket var samma procentandel av icke–sackarisceller som hittades i de kazakiska cellberikade transplantaten. I överensstämmelse med dessa resultat fann vi också att när omogna neonatala svinpankreatiska cellkluster transplanterades i nakna möss, var transplantaten många månader senare 95% av 99-celler (29). Detta fenomen av de föreliggande experimenten med råttöar kan förklaras av preferensdöd hos de icke-sackarisceller som beskrivits tidigare (30-33). Dessa studier och våra egna drar slutsatsen att minskningen huvudsakligen förklaras av glukagonproducerande celler (30-33). Vi vet inte om även cellerna i PP och cellernas celler försvinner. Den perifera lokaliseringen av celler i gnagaröar kan potentiellt göra dem mer sårbara för skador under isoleringen. Även om vi inte har studerat detta i detalj i den aktuella studien, har tidigare studier visat att detta inte är den främsta orsaken till förlust av celler i celler efter transplantation. I en studie av Lau et al. (33), holmar som implanterats i levern hade förlorat sina celler enligt följande: 4 veckor efter transplantationen, medan holmar som implanterats i njurarna från samma isolering inte hade gjort det, vilket tyder på att isoleringsrelaterade händelser inte hade orsakat förlusten av dessa perifera celler (33). I den studien visade holmar som implanterades intraportalt förlust av celler i enlighet med detta, medan holmar som implanterades under njurkapseln inte visade någon förlust av celler i enlighet med detta. I den föreliggande studien såg vi förlust av icke-bronkialceller i holmar under njurkapseln 1 vecka efter implantation. En skillnad mellan deras studie och denna studie är att de implanterade öar i normoglykemiska råttor, medan i den aktuella studien var mottagarna hyperglykemiska möss. Det är möjligt att skillnader i metabolisk belastning på ötransplantatet kan påverka överlevnaden av cellerna i cellerna. Det kan inte uteslutas att förlusten av celler i celler i levern är snabbare, som Lau et al. (33) rapporterade. Gunther et al. (31) rapporterade förlusten av celler i enlighet med cu redan 2 dagar efter implantation i levern hos diabetesråttor (31). Eftersom normala nivåer av glukagon och andra peptider som inte härrör från celler i celler fortfarande produceras av den endogena bukspottkörteln, är det möjligt att cellerna som inte innehåller celler i transplantaten försvinner på grund av involution för att förhindra hyperglukagonemi.
den hypotetiska frågan, som en dag kan vara av praktisk betydelse, är om ett transplantat av rena bronkialceller skulle ge ett adekvat transplantationsresultat. När det gäller hela kroppens metaboliska effekter av glukagonsekretion från transplantat verkar det som om utsöndring från transplantat ger minimalt skydd mot akut hypoglykemi (34), men mänskliga ötransplantationer kan bibehålla nära normala glukosnivåer. Den ihållande glukagonsekretionen från bukspottkörteln kan ge något bidrag till glukoshomeostas men återigen lite skydd mot akut hypoglykemi. Dessa bristfälliga glukagonsvar kan göra mottagarna mer benägna att hypoglykemi under träning (35,36), men detta är osannolikt att uppväga fördelarna. Nästa fråga är om det finns något viktigt lokalt inflytande av holmar som inte är oc-cellernac-cellernac-cellernac-cellernac-cellernac-cellernac-cellfunktion. Med tanke på den lilla ön mikrovaskulära anatomi och fysiologiska experiment som visar att icke–β-celler påverkas nedströms av β-celler (13,14), verkar det troligt att de flesta β-celler påverkas inte av icke–β-celler. En del insikter kan ges av våra mätningar som bestämde hur långt cellerna från icke-cellerna var borta från cellerna. När vi kvantifierade antalet celler som befann sig i närheten av en cell som inte var i närheten av en cell som inte var i närheten av en cell som inte var i närheten av en cell som inte var i närheten av en cell som inte var i närheten av en cell som inte var i närheten av en cell som inte var i närheten av en cell som inte var i närheten av en cell som inte var i närheten av en cell som inte var i närheten av en Det verkar osannolikt att lokal sekretion från icke-bronkialceller kan ha mycket parakrinpåverkan på det avståndet. Dessutom, från studier av andra (37,38), vet vi att mikrovaskulaturen hos transplanterade öar är väldigt annorlunda än normalt. Således är anatomin hos ötransplantat mycket annorlunda än öar i bukspottkörteln, men dessa transplantat är fortfarande effektiva för att reversera hyperglykemi hos diabetiska mottagare.
sammanfattningsvis fann vi att β-cell–berikad aggregat effektivt kan vända hyperglykemi hos möss, och att transplanterade intakt holmar är slut i icke–β-celler. Det är därför troligt att holmar som inte är celler som inte är nödvändiga för en lyckad holmetransplantation.