Resumen
Se han identificado receptores alfa 1-adrenérgicos de una línea de células musculares no fusionadas (BC3H1) en preparaciones de células intactas y rotas utilizando el antagonista de alta afinidad prazosina. En células intactas, los estudios de equilibrio y cinéticos dieron valores de KD en el rango de 0,07-0,12 nM. El número máximo de sitios de unión determinado por el análisis de Scatchard fue de aproximadamente 85,000 +/- 9,000 sitios / célula. Antagonistas unidos a los sitios de unión de prazosina con características Michaelis-Menten, y su especificidad era típica de los receptores alfa 1-adrenérgicos. No se observó ninguna modificación significativa de la unión al antagonista, ni después de la interrupción celular ni al bajar la temperatura de incubación a 4 grados. En contraste, en células intactas a 37 grados, las curvas de competencia agonistas fueron poco profundas con coeficientes de colina de menos de 1. La heterogeneidad de los sitios de unión de prazosina hacia (ERS)-norepinefrina también apareció en experimentos de saturación de prazosina realizados en ausencia y en presencia de este agonista. Después de la disrupción celular, los valores de EC50 de las curvas de competencia agonistas disminuyeron y los coeficientes de Hill fueron cercanos a 1. Cuando la temperatura se redujo de 37 grados a 4 grados, la afinidad por (–)-norepinefrina en células intactas aumentó dramáticamente en 10,000 veces y el coeficiente de Colina de la curva de competencia fue igual a la unidad. Este cambio de afinidad inducido por la temperatura no fue tan importante en las preparaciones de células rotas (50 veces).