Figura 3: ICC con anticuerpo Drosha (ab12286)
Amniocitos femeninos humanos inmunotenidos con Drosha (FITC) (dilución 1/25). El ADN está marcado de color rojo con yoduro de propidio.
RISC y RITS
Los estudios en la levadura de fisión (Schizosaccharomces pombe) han demostrado que el silenciamiento centromérico (el proceso de silenciar transgenes que se integran en regiones centroméricas repetidas) requiere componentes de la ruta del ARNi y, por lo tanto, en este caso, el silenciamiento opera a nivel transcripcional (Ekwall 2004; Verdel y Moazed 2005).
El complejo efector en la levadura de fisión parece ser distinto del RISC. Los ARNIS se incorporan en su lugar en un complejo denominado RITS (Iniciación inducida por ARN del Silenciamiento de Genes Transcripcionales). RITS comprende una proteína de cromodominio (Chp1), Argonauta 1 (Ago1), una proteína de función desconocida, Tas3, así como moléculas de ARNip.
RITS se dirige a áreas cromosómicas específicas para silenciar a través de la producción de una estructura represiva de cromatina conocida como heterocromatina a través de la metilación de histonas.
Resumen
El ARNi mediado por la introducción de un ARND largo se ha utilizado para investigar la función génica en una variedad de organismos, incluidos plantas y Drosophila, sin embargo, este enfoque no puede aplicarse a las células de mamíferos, ya que la introducción de ARND de más de 30 nucleótidos induce una respuesta inespecífica al interferón (respuesta antiviral), que da lugar a la degradación del ARNm y también causa una inhibición global de la traducción del ARNm.
Para evitar estos problemas, se pueden usar moléculas de ARNip sintetizadas químicamente que imitan productos Dicer para investigar la función génica en mamíferos.
Alternativamente, los vectores de plásmidos diseñados para producir moléculas de ARN de horquilla corta pueden explotarse para inducir el silenciamiento de genes en sistemas de mamíferos. Por lo tanto, en el futuro puede ser factible tratar enfermedades humanas al interrumpir la expresión génica dirigiendo la degradación de ARNm específicos.
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