główne badania laboratoryjne stosowane w diagnostyce dziedzicznej sferocytozy (HS) obejmują następujące:
-
morfologia krwi
-
liczba retikulocytów
-
średnie stężenie hemoglobiny krwinkowej (MCHC)
-
rozmaz krwi obwodowej
-
poziom dehydrogenazy mleczanowej (LDH)
-
bilirubina frakcjonowana
-
cytometria przepływowa przy użyciu testu wiązania eozyno-5′ – maleimidu (EMA)
osmotyczna ekstacytometria gradientu, chociaż uznawana za referencyjną technikę diagnostyki membrany krwinek czerwonych (RBC) zaburzenia, jest rzadko stosowany w praktyce klinicznej ze względu na ograniczoną dostępność. Opracowano jednak nową generację ektacjometrów, co może skutkować szerszym zastosowaniem tej techniki. Technika ta nie odróżnia HS i autoimmunologiczna niedokrwistość hemolityczna (AIHA), ale odróżnia HS od innych dziedzicznych zaburzeń błony.
klasyczne cechy laboratoryjne HS obejmują następujące :
-
łagodna do umiarkowanej niedokrwistość
-
Retikulocytoza
-
zwiększone MCHC
-
Sferocytów na rozmazie krwi obwodowej
-
hiperbilirubinemia
morfologia RBC w HS jest charakterystyczna, ale nie diagnostyczna. Anizocytoza jest widoczna, a mniejsze komórki są sferocytami. W przeciwieństwie do sferocytów związanych z immunologiczną chorobą hemolityczną i uszkodzeniem termicznym, sferocyty HS są dość jednolite pod względem wielkości i gęstości. Sferocyty charakteryzują się następującymi:
-
brak centralnej bladości
-
zmniejszenie średniej średnicy ciała
-
zwiększona gęstość.
Sferocyty RBC nie są specyficzne dla HS. Autoimmunologiczna niedokrwistość hemolityczna może również powodować sferocytozę, ale zaburzenie to zwykle można wykluczyć negatywnymi wynikami bezpośredniego testu antyglobulinowego.
zwiększona MCHC jest charakterystyczną cechą komórek RBCs w HS. Często występują wartości MCHC większe od górnej granicy normy (35-36%). To zwiększone MCHC jest wynikiem łagodnego odwodnienia komórkowego. Średnia objętość komórek (MCV) u pacjentów z HS jest rzeczywiście niska, prawdopodobnie z powodu utraty błony i odwodnienia komórek.
najbardziej czułym testem dla HS jest inkubowane badanie kruchości osmotycznej (OFT), które wykonuje się po inkubacji RBC przez 18-24 godziny w sterylnych warunkach w temperaturze 37°C. często z Rbc, które nie zostały inkubowane, może wykazywać hemolizę komórek HS u niektórych pacjentów, ale nie jest wiarygodne. Jest to szczególnie prawdziwe w przypadku noworodków, jak płodowe RBC są na ogół bardziej odporne na hemolizę osmotyczną. Inkubowane często wyniki są zwykle nieprawidłowe. Stabilność próbki ma kluczowe znaczenie dla OFT i próbek krwi nie należy przechowywać w lodówce dłużej niż 2 dni przed badaniem.
chociaż OFT jest tradycyjnie stosowany do diagnozowania HS, jego wykonanie jest pracochłonne i czasochłonne. Zamiast tego, obecne wytyczne zalecają stosowanie cytometrii przepływowej do przesiewania dla HS.
inne badania laboratoryjne stosowane do diagnozowania HS obejmują test autohemolizy i test lizy glicerolu. Te rzadko są używane i nie oferują żadnej przewagi nad często.
możliwa jest dalsza charakterystyka specyficznej zmiany błony poprzez poszukiwanie nieprawidłowości w spektrynie, ankyrinie, pallidynie lub paśmie 3. Siarczan dodecylu sodu-poliakrylamid żel elektroforeza (SDS-PAGE) może wykryć wadliwe białko w większości przypadków; może to być przydatne do odróżnienia HS od innych zaburzeń hematologicznych, które mogą go naśladować, takich jak wrodzona niedokrwistość dyserytropoietyczna typu II. jednak badania te nie są rutynowo wykonywane i są dostępne tylko w wybranych laboratoriach badawczych.
osmotyczna ekstacytometria gradientowa jest techniką referencyjną do diagnozowania zaburzeń błony RBC. W tej technice wiskozymetr laserowo-dyfrakcyjny (ektacjometr) mierzy odkształcalność erytrocytów jako ciągłą funkcję osmolalności ośrodka, w którym są zawieszone. Osmotyczna ekstacytometria gradientu odróżnia HS od innych dziedzicznych patologii błonowych, ale nie odróżnia HS od autoimmunologicznej niedokrwistości hemolitycznej.
inne badania są wskazane u pacjentów, którzy doświadczyli kryzysu aplastycznego. Badania na obecność wirusa opryszczki pospolitej, parwowirusa B19 i mononukleozy zakaźnej mogą pomóc w identyfikacji zakaźnej etiologii kryzysu aplastycznego. Poziom witaminy B12 i kwasu foliowego należy mierzyć w celu określenia zapasów odżywczych podczas powrotu do zdrowia po kryzysie aplastycznym.
jeśli diagnoza jest dokonywana późno w życiu, pacjenci muszą mieć ocenę ich statusu żelaza, zwłaszcza jeśli otrzymali częste transfuzje krwi (na przykład z powodu wielu epizodów hemolitycznych lub niedokładnej diagnozy) lub przedłużonej doustnej suplementacji żelaza w niedokrwistości. Ocena ta obejmuje pomiar zapasów żelaza i stężenia ferrytyny w surowicy. U pacjentów z ciężkim obciążeniem żelazem mogą występować zaburzenia czynności wątroby lub zaburzenia czynności serca.
zapalenie pęcherzyka żółciowego i kamica żółciowa są częstymi powikłaniami HS. Jeśli pacjent przedstawia oznaki i objawy hemolizy oprócz bólu w prawym górnym kwadrancie brzucha, gorączki i leukocytozy, należy wykonać USG drzewa żółciowego.
jeśli sugeruje się wystąpienie kryzysu aplastycznego, należy przeprowadzić dalszą ocenę białych krwinek i płytek krwi. W celu wykluczenia aplazji lub megaloblastozy może być konieczne wykonanie aspiracji szpiku kostnego i biopsji. Uzyskanie aspiratu szpiku kostnego do badań rzadko jest konieczne, z wyjątkiem przypadków kryzysu aplastycznego lub megaloblastycznego. Wyniki badań pomagają ocenić czynność szpiku i rozwój linii.