I principali studi di laboratorio utilizzati nella diagnosi di sferocitosi ereditaria (HS) includono quanto segue:
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Completo di globuli
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conteggio dei reticolociti
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corpuscolare Medio della concentrazione di emoglobina (MCHC)
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striscio di sangue Periferico,
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Lattato deidrogenasi (LDH) livello
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bilirubina Frazionata
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citometria a Flusso utilizzando il eosina-5′-con (EMA) test di associazione
gradiente Osmotico ektacytometry, anche se riconosciuta come la tecnica di riferimento per la diagnosi di globuli rossi (RBC) membrana raramente è stato utilizzato nella pratica clinica a causa della sua limitata disponibilità. Tuttavia, è stata sviluppata una nuova generazione di ektacytometers che può comportare un uso più ampio di questa tecnica. Questa tecnica non distingue tra HS e anemia emolitica autoimmune (AIHA), ma distingue HS da altri disturbi ereditari della membrana.
Le caratteristiche classiche del laboratorio di HS includono quanto segue :
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da Lieve a moderata anemia
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Reticulocytosis
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Aumentato MCHC
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Spherocytes su striscio di sangue periferico,
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Iperbilirubinemia
RBC morfologia in HS è una caratteristica distintiva di sicurezza non diagnostica. L’anisocitosi è prominente e le cellule più piccole sono sferociti. A differenza degli sferociti associati alla malattia emolitica immunitaria e al danno termico, gli sferociti HS sono abbastanza uniformi per dimensioni e densità. Gli sferociti sono caratterizzati da quanto segue:
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Mancanza di pallore centrale
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Diametro corpuscolare medio diminuito
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Aumento della densità.
I globuli rossi sferocitici non sono specifici dell’HS. L’anemia emolitica autoimmune può anche produrre sferocitosi, ma questo disturbo di solito può essere escluso da risultati negativi su un test antiglobulinico diretto.
Un aumento di MCHC è una caratteristica delle cellule RBCS in HS. I valori di MCHC superiori al limite superiore del normale (35-36%) sono comuni. Questo aumento di MCHC è il risultato di una lieve disidratazione cellulare. Il volume cellulare medio (MCV) nei pazienti con HS è in realtà basso, presumibilmente a causa della perdita di membrana e della disidratazione cellulare.
Il test più sensibile per HS è incubated osmotic fragility testing (OFT), che viene eseguito dopo l’incubazione di globuli rossi per 18-24 ore in condizioni sterili a 37°C. OFT con globuli rossi che non sono stati incubati può dimostrare l’emolisi delle cellule HS in alcuni pazienti, ma non è affidabile. Ciò è particolarmente vero per i neonati, poiché i globuli ROSSI fetali sono generalmente più resistenti all’emolisi osmotica. I risultati spesso incubati di solito sono anormali. La stabilità del campione è critica per OFT ed i campioni del sangue non dovrebbero essere refrigerati per più di 2 giorni prima della prova.
Anche se SPESSO è stato tradizionalmente utilizzato per la diagnosi di HS, è ad alta intensità di lavoro e richiede tempo per eseguire. Invece, le linee guida attuali raccomandano l’uso della citometria a flusso per lo screening per HS.
Altri test di laboratorio utilizzati per diagnosticare HS includono il test di autoemolisi e il test di lisi del glicerolo. Questi raramente vengono utilizzati e non offrono alcun vantaggio rispetto OFT.
È possibile un’ulteriore caratterizzazione della lesione specifica della membrana cercando anomalie in spectrina, anchirina, pallidina o banda 3. Sodio dodecil solfato-poliacrilammide gel elettroforesi (SDS-PAGE) è possibile rilevare la proteina difettosa nella maggior parte dei casi, questo può essere utile per distinguere HS da altri disturbi ematologici che possono simulare, come congenita dyserythropoietic anemia di tipo II. Tuttavia, questi studi non sono eseguite regolarmente e sono disponibili solo in determinati laboratori di ricerca.
Osmotic gradient ektacytometry è la tecnica di riferimento per la diagnosi dei disturbi della membrana RBC. In questa tecnica, un viscosimetro a diffrazione laser (ektacytometer) misura la deformabilità degli eritrociti come funzione continua dell’osmolalità del mezzo in cui sono sospesi. Osmotic gradient ektacytometry distingue HS da altre patologie ereditarie della membrana, ma non differenzia HS da anemia emolitica autoimmune.
Altri test sono indicati in pazienti che hanno avuto una crisi aplastica. Test per il virus herpes simplex, parvovirus B19, e mononucleosi infettiva può aiutare a identificare un’eziologia infettiva per la crisi aplastica. I livelli di vitamina B12 e folati devono essere misurati per determinare le riserve nutrizionali durante il recupero da una crisi aplastica.
Se la diagnosi viene fatta in ritardo nella vita, i pazienti devono avere una valutazione del loro stato di ferro, specialmente se hanno ricevuto frequenti trasfusioni di sangue (ad esempio, a causa di episodi emolitici multipli o una diagnosi imprecisa) o una prolungata integrazione orale di ferro per l’anemia. Questa valutazione include la misurazione delle riserve di ferro e dei livelli sierici di ferritina. Disfunzione epatica o problemi cardiaci possono essere presenti in pazienti con grave sovraccarico di ferro.
Colecistite e colelitiasi sono complicazioni comuni di HS. Se il paziente presenta segni e sintomi di emolisi oltre al dolore del quadrante addominale superiore destro, alla febbre e alla leucocitosi, deve essere eseguita un’ecografia dell’albero biliare.
Se viene suggerita una crisi aplastica, deve essere perseguita un’ulteriore valutazione dei globuli bianchi e delle piastrine. Ciò può richiedere un’aspirazione e una biopsia del midollo osseo per escludere l’aplasia o la megaloblastosi. Ottenere l’aspirato del midollo osseo per il test raramente è necessario tranne nei casi di crisi aplastica o megaloblastica. I risultati dei test aiutano a valutare la funzione del midollo e lo sviluppo del lignaggio.