Proteïnekinasen zijn de grootste enzymsuperfamilie die betrokken is bij de transductie van celsignalen en zijn therapeutische doelwitten voor een reeks ziekten. Er zijn intensieve inspanningen van vele laboratoria geweest om hun katalytische mechanismen te begrijpen, inhibitors te ontdekken en hun cellulaire functies te onderscheiden. In dit overzicht zullen we twee benaderingen beschrijven die zijn ontwikkeld om eiwitkinasen te analyseren: bisubstraat analoge remming en fosfonaat analoog gebruik. Beide methoden zijn gebruikt in combinatie met de eiwit semisynthese methode uitgedrukt eiwit ligation om ons begrip van kinase-substraat interacties en functionele opheldering van phosphorylation te bevorderen. Het vorige werk over de aard van het eiwitkinasemechanisme stelt voor het volgt een dissociatieve overgangsstaat. Een bisubstraat analoog werd ontworpen tegen de insuline receptor kinase om de geometrie van een dissociatieve transitie toestand reactiecoördinaat afstand na te bootsen. Deze bisubstrate-samenstelling bleek een machtige inhibitor tegen het insulinereceptorkinase te zijn en bezette zowel peptide als nucleotidebindingsplaatsen. Bisubstrate samenstellingen met veranderd waterstofbindingspotentieel evenals variërende afstandhouders tussen adenine en peptide tonen het belang van de originele ontwerpeigenschappen aan. We hebben ook aangetoond dat verwante bisubstrate analogen kunnen worden gebruikt om serine/threonine kinases met inbegrip van eiwit kinase a krachtig te blokkeren. Aangezien vele eiwitkinases gevouwen eiwitsubstraten voor efficiënte phosphorylation erkennen, was het voordelig om de peptide-ATP-conjugaten in eiwitstructuren op te nemen. Gebruikend uitgedrukt eiwit ligation, werd een Src-ATP conjugaat geproduceerd en getoond om een hoge affiniteit ligand voor het CSK tyrosinekinase te zijn. Niet-hydrolyseerbare nabootsingen van phosphoSer / phosphoTyr kunnen nuttig zijn bij het onderzoeken van de functionaliteit van phosphorylation gebeurtenissen. Gebruikend uitgedrukte eiwit ligation, hebben wij phosphonomethyleen phenylalanine en phosphonomethyleen alanine aangewend om phosphorylation van Tyr en ser, respectievelijk te sonderen. Deze hulpmiddelen hebben een analyse van de SH2-fosfatases (SHP1 en SHP2) toegestaan, onthullend een nieuwe intramoleculaire stimulatie van katalytische activiteit die door de overeenkomstige phosphorylation gebeurtenissen wordt bemiddeld. Zij zijn ook gebruikt om de cellulaire verordening van het melatonine ritmeenzym door phosphorylation te karakteriseren.