Figur 3: ICC med Drosha-antikropp (ab12286)
humana kvinnliga amniocyter immunostained med Drosha (FITC) (1/25 utspädning). DNA är märkt rött med propidiumjodid.
RISC och RITS
studier i fissionsjäst (Schizosackaromces pombe) har visat att centromerisk tystnad (processen för att tysta transgener som integreras i centromeriska upprepade regioner) kräver komponenter i RNAi-vägen och därför fungerar i detta fall tystnad på transkriptionsnivå (Ekwall 2004; Verdel och Moazed 2005).
effektorkomplexet i fissionsjäst verkar skilja sig från RISC. siRNAs införlivas istället i en komplex benämnd RITS (RNA-inducerad initiering av transkriptionell Gendämpning). RITS innefattar ett kromodomainprotein (Chp1), Argonaute 1 (Ago1), ett protein med okänd funktion, Tas3, såväl som siRNA-molekyler.
RITS riktar sig mot specifika kromosomala områden för att tysta genom produktion av en repressiv kromatinstruktur som kallas heterochromatin genom histonmetylering.
sammanfattning
RNAi medierad av introduktionen av lång dsRNA har använts för att undersöka genfunktion i en mängd olika organismer inklusive växter och Drosophila, men detta tillvägagångssätt kan inte tillämpas på däggdjursceller eftersom införandet av dsRNA längre än 30 nukleotider inducerar ett icke-specifikt interferonrespons (antiviralt svar), vilket resulterar i nedbrytning av mRNA och orsakar också en global hämning av mRNA-översättning.
för att kringgå dessa problem kan kemiskt syntetiserade siRNA-molekyler som efterliknar Dicer-produkter användas för att undersöka genfunktion hos däggdjur.
alternativt kan plasmidvektorer utformade för att producera korta hårnål-RNA-molekyler utnyttjas för att inducera gentystning i däggdjurssystem. Således kan det i framtiden vara möjligt att behandla mänskliga sjukdomar genom att stänga av genuttryck genom att styra nedbrytningen av specifikt mRNA.
se alla RNA-interferensresurser.