medlemskap och aktiviteter
Opus Dei krävde ursprungligen nya medlemmar att ta ett löfte om lydnad och kyskhet. Sedan organisationen blev en prelatur har den emellertid endast krävt ett avtalsenligt åtagande att ta emot andlig bildning, som inkluderar veckokurser (”cirklar”) och en årlig religiös reträtt, bland andra aktiviteter. Medlemmar utövar ofta självuppoffring, vilket kan inkludera fasta och avhållsamhet från vissa nöjen, och självdöd, såsom att bära en cilice (som ofta har formen av en spetsad kedja som bärs runt övre låret), avskräcks inte. Nya medlemmar tjänar en prövotid, som varar minst fem år, innan de är helt antagna. Vissa medlemmar i Opus Dei, kallade numeraries, ägnar mycket av sin tid åt organisationen. Liksom präster måste de förbli ogifta och celibat, men de lever i världen och bedriver sekulära yrken. Majoriteten av medlemmarna är dock de övertaliga, som är fria att gifta sig, bidrar ekonomiskt till Opus Dei och visar Kristen dygd i sin dagliga verksamhet. Gruppen får också ekonomiskt stöd av samarbetspartners, som inte är medlemmar och, med tillstånd från Heliga stolen, behöver inte ens vara kristna. Ordinerade präster utgör bara en liten andel av organisationen; 2016 numrerade de cirka 2 100 av de nästan 95 000 medlemmarna över hela världen.
organisationen har etablerat yrkes -, handels -, hemkonst-och jordbrukscentra i olika delar av världen, många gymnasier, Företagsekonomiska skolor och välgörenhetsverksamhet. Opus Dei grundade och utrustade (med statligt stöd) universitetet i Navarra, som av många betraktas som Spaniens finaste universitet, och driver det påvliga universitetet i Heliga Korset i Rom och Universitetet i Piura i Peru.